【黑曲霉菌的发酵设备，微生物的生产工艺流程】

黑曲霉发酵生产α-淀粉酶；摘要本实验通过黑曲霉发酵生产α-淀粉酶，发酵周期；关键词黑曲霉发酵α-淀粉酶特征参数；AbstractThetestwereunder；KeywordsAspergillusniger；前言；α-淀粉酶(α-1,4-D-葡萄糖-葡萄糖苷水解；耐酸性α-淀粉酶与中性α-淀粉酶对淀粉的作用机制；本实验通过黑曲霉发酵生产α-淀粉酶的实验过

摘要 本实验通过黑曲霉发酵生产α-淀粉酶，发酵周期为66h。每隔6h取一次样，对发酵罐发酵过程的特征参数进行了初步研究，分析了生物量、pH值、残糖含量、酶活力的变化，并绘制出变化曲线，从而得到黑曲霉生产α-淀粉酶过程中理化性质的变化。

 主要仪器和设备：5 L搅拌式发酵罐、离心机、分光光度计等。

1.1.2 培养基

发酵培养基配方：可溶性淀粉75 g，蔗糖75g，柠檬酸氢二铵80 g，KH2PO4 15 g，CaCl2 0.5 g，FeSO4·7H2O 0.5 g，MgSO44·7H2O 0.5 g，加水定容至5 L，pH 5.0，消泡剂(植物油)3 mL。

1.2 方法

1.2.1 发酵实验步骤

1.2.1.1 空消

先开启蒸汽发生器，自有蒸汽产生并排掉管路中冷凝水后，按以下步骤进行：

(1) 先关闭所有阀门，检查处是否关紧密封，打开罐上方排气口。

(2) 蒸汽先进空气系统，蒸汽→蒸汽过滤器→分过滤器，无论蒸汽走到哪一路得先放尾阀，放出冷凝水，排掉冷空气，待有蒸汽冲出后调小，打开主阀。

(3) 再进罐体：由主路进罐，然后通入取料管路，再入补料系统(两边)。

(4) 罐压升至所需温度(121 ℃)时开始计时，保温保压30 min。

(5) 结束空消：逆着蒸汽进路关，先关近罐阀。同时准备好压缩空气确保蒸汽一停即充入无菌压缩空气以维持空气系统及罐内的正压。近罐空气阀的尾阀要一直微开启。

1.2.1.2 种子制备

接种黑曲霉于PDA液体培养基中，液体摇瓶培养。

1.2.1.3 培养基配制、实消

按照配方配制发酵培养基，然后进行实消。闭气路入罐阀，主汽路进汽→补

料口进汽(方法同空消)→罐压升至0.12 MPa(121 ℃)，保压、保温30分钟→实消结束。

1.2.1.4 冷却接种与发酵

待培养基冷却至28 ℃左右时，在加料口周围放一圈酒精棉球，点燃，在无菌条件下打开进料口，迅速接种。将温度、搅拌转速、通气量等参数设定好后，进行发酵。

1.2.2 发酵参数检测

1.2.2.1 pH的测定

标准液校准pH计后，测定样品pH值。

1.2.2.2 生物量的测定

每次取10 mL的发酵液，先用大离心机(5000 rpm, 10 min)离心，收集上清液用来测酶活和残糖(5000 rpm上清直接测残糖，再取出1mL，10000rpm离心后的上清测酶活)，沉淀用水清洗几次后再离心，然后将所得沉淀放入100 ℃烘箱中，烘干(2 h左右)，然后测其干重，取平均值。